Диагностика сифилиса и ВИЧ

Иммуночип для диагностики сифилиса и ВИЧ‑инфекции

Цель: разработка и анализ диагностической эффективности тест-системы в формате иммуночипа для одновременного определения антител класса IgG к возбудителям сифилиса (Treponema pallidum) и ВИЧ-инфекции (Human immunodeficiency virus).

Материалы и методы: использовали рекомбинантные белки Тр15, Тр17, ТmрА, Тр47 (T. pallidum) и p24, gp120, gp160, p17-p24-p15 (HIV) производства ЗАО БТК «Биосервис» (Россия). Внутренним отрицательным контролем являлся PBS (Sigma; США), положительным – IgG человека (Bioss; США).

В качестве основы для печати иммуночипов для диагностики сифилиса и ВИЧ использовали стекла с аминосилановым покрытием (Corning, США). Нанесение антигенов проводили с использованием спотера для бесконтактной печати sciFflexarrayer S1 (Scenion; Германия), технические возможности которого обеспечивают формирование капель объёмом 300–360 пиколитров.

Диагностическую эффективность иммуночипа для диагностики сифилиса и ВИЧ оценивали набором референсных сывороток, предоставленных компанией BIO-Rad (США) в рамках программы «External Quality Assurance Services». Выявление комплексов «антиген – антитело» на поверхности иммуночипа осуществляли с использованием ослиных антител к IgG человека, коньюгированных с флуоресцентным красителем Cy5 (Bioss; США). Учет результатов проводили с использованием чипридера InnoScan 710 (Innopsys; Франция), регистрирующего интенсивность сигнала, поступающего от флуорохрома Cy5. Результаты сканирования визуализировали в программе Mapix, поставляемой в комплекте с чип-ридером.

Результаты: проведен комплекс работ по конструированию иммуночипа для диагностики сифилиса и ВИЧ, рассчитанного на одновременное выполнение 16 исследований, включая положительный и отрицательный контроли. Определена оптимальная нагрузка на спот, обеспечивающая наилучшую дискриминацию «положительных» и «отрицательных» сывороток и составившая 500 пг для каждого из использованных антигенов. Показана целесообразность использования анализируемых сывороток в разведении 1:10, что обеспечивает высокий уровень флуоресцентного сигнала. Предложена процедура преадсорбции исследуемых сывороток, снижающая интенсивность неспецифической флуоресценции Рассчитаны пороговые значения флуоресценции, наиболее эффективно дифференцирующие «положительные» и «отрицательные» сыворотки. Итоговая диагностические чувствительность и специфичность тест-системы составили 95–100 %.

Выводы: разработанная модель иммуночипа обеспечивает миниатюризацию и высокую производительность диагностического исследования, что делает его потенциально востребованным при проведении массового скрининга на сифилис и ВИЧ-инфекцию.

ШПИЛЕВАЯ М. В.
ФГБУ «ГНЦДК» Минздрава России, г. Москва

 

1 Звезда2 Звезды3 Звезды4 Звезды5 Звезд (Пока оценок нет)
Загрузка...